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硼酸亲和层析技术，作为糖分子的“精准捕手”，凭借其高特异性、可逆性与通用性，已成为糖科学研究的“有效工具”。在含有糖基化的蛋白分子的生产过程中，利用硼酸亲和填料进行糖蛋白的精准捕获，去除不需要的杂质，将药物纯度提升至更高水平，满足药品法规要求。

“捕捉手”怎么抓住糖蛋白?——分子层面的“锁-钥”作用

硼酸亲和的主导，有的是场“精准服务匹配”——硼酸基团和糖淀粉酶中的“特别设计”的特异形整合。

具体来说，糖蛋白的糖链上有1,2-或1,3-顺式邻二羟基(可以理解为糖链上的“小抓手”)，而硼酸在碱性条件(通常pH 7.0~9.0)下变成带负电的“四价硼酸根”会捕获“小抓手”，形成稳定的五元或六元环状复合物，把糖蛋白牢牢“抓”在填料上。

洗刷时，要优化条件就能“解锁教程”：如减低pH(造问用pH <6.0的抗震液)，使其相结合力下降，一些加甘霖醇、山梨醇例如含顺式邻二羟基的物质(“竞争力钥匙”)，把糖球蛋白酶“挤”出来了。一整个时候既还要繁复的化学制剂，又能炎症因子聊天靶点糖球蛋白酶，这也是它在科学试验中受热烈欢迎的基本点现象[1]。

图1. 硼酸与含邻二醇类化合物充分效用的图示图[1]

“捕捉工具”怎么选?——亲水性聚合物基质亲和填料

硼酸亲和技術的效率，好大能力上在于于“媒介”，即配用硼酸基团的“骨架”——填充料栽培产品。整合物栽培产品机戒效果高，能力受更加高空气流速，適合工业企业级大面积纯化。

杏彩体育网 Monomix HC60-Boronate硼酸亲和填料，以亲水性单分散聚甲基丙烯酸酯为基质，均一性好(接近单分散颗粒)，抗压性强，选择性高，具有良好的物理化学稳定性，填料表面具有高度亲水性，最大程度地避免与生物类样品的非特异性吸附，山梨醇动态结合载量≥30 μmol/mL，广泛适用于糖蛋白、核苷酸、多糖等生物样品的精纯阶段。

表1. Monomix HC60-Boronate硼酸亲和活性炭过滤器的系统参数指标

实验踩坑?——这些问题有解法

硼酸亲和层析的通常情况流程涉及：

01 样品准备

将待纯化的糖淀粉酶印刷品在偏碱缓冲区液中直接稀释就可以，保证顺式二醇基团与硼酸基团彻底构建。

02 平衡

将层析柱用上面缓存液动取舍至相对稳定环境，以确保安全上样时原辅料要平均区域划分。动取舍液普遍选购磷酸，甘氨酸等。

03 上样

将待纯化的样件申请加入层析柱中，让配基与最终目标氧分子配合。提倡配合高速度4-6 min驻留时候。

04 洗杂

用适当的的缓存液擦拭层析柱，避开未紧密联系的悬浮物。

05 样品洗脱

能够变化洗刷能力，如变化pH值，阴离子程度或更改竞争与合作性配体，使对方原子核与配基分离出来。能施用pH<5.0的甘氨酸或乙酸盐降底液降底pH值做出洗刷。若在酸中蛋白酶质不稳定的，能施用弱酸性还有偏酸碱性具有顺式二羟基小原子核，如山梨醇、杨枝醇的洗刷液。

06 层析柱再生

寻常用0.1-0.5 M NaOH，对层析柱通过恢复，为了通过下有一次实验设计。

常见问题解答(FAQ)

Q1· 杂蛋白吸附多，目标蛋白纯度低

可能原因：层析填料对杂质有离子、疏水等次级作用力，导致杂蛋白“粘”在上面。

解决方法：

修正联系实际降低液pH到8.0以上(大多都数糖淀粉酶质的较佳联系实际pH)，避开pH过高(>10)引起淀粉酶质男变女; 在加载液里加0.05%-0.1%Tween-20(表面层活力性剂)，缩短疏水粘附，也许加50-100 mM NaCl，用盐铝离子“冲掉”杂蛋白酶。

Q2· 目标蛋白洗脱不下来，收率低

可能性原因：硼酸与糖链根据力太强，也可以过柱液浓度值达不到。

解决方法：

把过柱液pH降至4.0这(列如0.1 M乙酸储存液)，也可以过柱液里加0.1-1.0 M杨枝醇/山梨醇(争夺剂)，明显增强过柱郊果; 洗刷时变快水流量，使洗刷液和塑料填料积极打交道，规避出现了对象球蛋白洗刷不齐全的情况报告。

Q3· 填料用几次就“失效”，载量下降

可能原因：填料上的硼酸基团脱落，或残留的蛋白未洗净，“掩盖”了配基。

解决方法：

每天用完后，先用0.1-0.5 M NaOH洗1-两个柱面积(洗去残余蛋清)，用纯手洗到一般的中性，另外用20%甲醇保留，以防便用烧碱溶液高温耐强碱长周期泡过; 选“化学交联型硼酸生物填料”(就比如硼酸基团和质粒之中有长链相连)，基团不特别容易易与锅炉炉壁进行剥离，有没有效延长至运用蓄电量。

订购信息

注：包装盒规模为1 L，5 L, 10 L, 50 L，预装柱规模为1 mL, 4.2 mL, 5 mL *参阅论文： [1]Li D, Chen Y, Liu Z. Boronate affinity materials for separation and molecular recognition: structure, properties and applications. Chem Soc Rev. 2015 Nov 21;44(22):8097-123. doi: 10.1039/c5cs00013k.